转膜与固定的具体步骤
admin
2024-01-21 19:18:27
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最近小编收到很多问题 ， 其中一个就是下面小编为大家整理一下关于转膜与固定的具体步骤的步骤 ， 希望这些方法能够帮助到大家 。
首先 ， 裁一张比凝胶大1mm的滤膜 ， 并切下膜的一角 ， 与凝胶切下的一角相一致 ， 在盘中放置一支持平台 ， 加入印迹缓冲液 ， 上面盖三张经20*SSC饱和过的滤纸 。
【转膜与固定的具体步骤】
然后 ， 在滤纸的两侧浸泡在缓冲液中 ， 用10ml的玻璃吸管在其表面小心滚动以赶出所有的气泡 ， 并将滤纸推平 。
然后 ， 加数毫升20*SSC于滤纸的表面 ， 将凝胶面向下倒扣在滤纸上 ， 小心赶出凝胶与滤纸间的气泡 ， 凝胶四周用胶布或塑料薄膜包裹以防缓冲液从凝胶周围直接流至凝胶上方的纸中 。
然后 ， 加入数毫升20*SSC浸没凝胶 ， 表面覆以滤膜 ， 裁三张大小合适的滤纸 ， 用20*SSC浸湿后铺在滤膜表面 。
然后 ， 放一叠干燥的吸水纸在3mm滤纸上 ， 置于一玻璃板于吸水纸上 ， 其上放一重0.75-1kg的物体 ， DNA转移可进行十二道十六小时 。
最后 ， 毛细管虹吸转移完毕 ， 小心拆卸印迹装置 ， 将膜与凝胶一起转移至干燥的滤纸上 ， 凝胶在上 ， 用软铅笔标记凝胶和滤膜的加样孔位置 ， 撕去凝胶 。
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